R éiceach

1. Bain an feadán reoite ó nítrigine leachtach agus láithreach isteach i ndabhach uisce 37 ℃, ag croitheadh ​​​​beagán. Tar éis don leacht leá (thart ar 1-1.5 nóiméad), tóg amach roinnt alcóil agus cuir ar an tábla oibre ultra-ghlan é.

2. Glac an fionraí cille isteach i bhfeadán lártheifneoir 15ml le meán 10ml (nigh an feadán reoite leis an meán agus nigh na cealla go léir atá greamaithe leis an mballa) agus lártheifneoir ag 1000 ar feadh 5 nóiméad.

3. Aisiompaíodh an súthaire agus cuireadh 1ml den mheán leis chun na cealla a chur ar fionraí. Deatach isteach i mias 10cm le 10 ml de mheánmhéid agus croith go réidh ar chlé agus ar dheis chun na cealla sa mhias a dháileadh go cothrom.

4. Marcáil an cineál cille agus an dáta, an t-ainm daonna, agus mar sin de, cuir sa ghorlann CO2 é, bata na cealla agus athraigh an meán.

5. Athraíodh an meán uair amháin gach 3 lá.

p assage

1. Rinneadh plandaí a thrasnú chun clúdach 80-90% a bhaint amach.

2. Abup an meán bunaidh .

3. Cuir an trypsin cuí leis (ach clúdaigh na cealla) agus díolama ar feadh 1-2 nóiméad .

4. Cuireadh deireadh leis an díleá trí thoirt chomhionann den mheán ina raibh séiream a chur leis .

5. Séid na cealla le gunna pípéad agus fág ar fionraí iad go léir.

6. Asúitheadh ​​cealla isteach i bhfeadán lártheifneora 15ml agus lártheifneoiríodh ag 1000 ar feadh 5 nóiméad.

7. Doirt an súthach agus cuir 1-2ml de mheán chun na cealla go léir a shéideadh suas.

8. Cuireadh cealla ar aghaidh chuig roinnt miasa cultúir ag brath ar na speicis cille. Go ginearálta, roinntear cealla ailse ina 5 chealla agus aistrítear trí chealla gnáth. Leanúint ar aghaidh ag saothrú.

Saor in aisce na cealla a dhíolama agus iad a lártheifneoiriú (ibid. thuas).

Cuir na cealla ar fionraí leis an tuaslagán stórála reoite meaitseála, roinn iad i bhfeadán reoiteoir steiriliú, sos ar feadh cúpla nóiméad, agus sonraigh an cineál cille agus an dáta stórála reoite.4 ℃ 30min, -20 ℃ 30min, -80 ℃ thar oíche, agus stóráil ansin i perfusion nítrigine leachtach.

Réiteach cryopreservation a ullmhú: 70% meánach 20% FBS 10% DMSO. Ba cheart DMSO a chur leis go mall agus a chroitheadh ​​go seasta.