Mar ábhar cúnta i dturgnaimh bhrath ELISA, einsím pláta Tá ról cinntitheach aige agus bíonn tionchar díreach aige ar na torthaí turgnamhacha deiridh. Tá cáilíocht an Pláta einsím ag brath go príomha ar a íogaireacht asaithe próitéine, an difríocht i gcumas asaithe próitéine idir plátaí agus poill, agus an difríocht idir baisceanna den cheannach pláta einsím . Dá bhrí sin, ag roghnú an pláta einsím táirge le híogaireacht asaithe próitéin ard, is é an difríocht bheag idir poill acmhainn asaithe próitéine, agus difríocht bheag idir baisceanna ná ráthaíocht don turgnamhoir torthaí turgnamhacha iontaofa agus cobhsaí a fháil.

Pláta einsím aicmiú: de réir caighdeáin éagsúla aicmithe, tá an pláta aicmithe éagsúla.

1: De réir líon na bpoll, is féidir é a roinnt ina 96 poill, 48 poill, etc. pláta einsím a úsáidtear go príomha leis an léitheoir micropláta, an plate méadar ar an margadh ar a mhéad 96 poill, mar sin tá an microplate 96 poill.

2: De réir na n-íochtair éagsúla, tá sé roinnte ina bun árasán, bun U, bun V, etc.

Tá an t-innéacs athraonta an bonn comhréidh íseal, atá oiriúnach le haghaidh a bhrath sa microplate;

T Tá an t-innéacs athraonta microplate U ard, áisiúil le haghaidh samplála, samplála, agus meascadh, agus is féidir leis an athrú datha a fheiceáil go díreach gan é a chur ar an microplate, ionas go gcinnteofar an bhfuil imoibriú imdhíonachta comhfhreagrach ann.

Is féidir le microplate an bonn V an sampla a ionsú go cruinn.

3: De réir na gcumas ceangailteach éagsúla atá ag an microplate agus próitéin agus móilíní eile, tá sé roinnte ina ardfhórsa ceangailteach, fórsa ceangailteach meánach, agus amination.

(1) Fórsa ceangailteach ard

Tar éis dromchla an mhicreaplate seo, feabhsaítear a chumas ceangailteach próitéin go mór, suas le 300 ~ 400ng IgG / cm2, agus is é meáchan móilíneach an phróitéin phríomhcheangail ná> 10 kD. Is féidir le húsáid an aicme seo de mhicreaplate an íogaireacht a fheabhsú, agus is féidir leis an tiúchan agus an méid próitéine brataithe a laghdú go réasúnta, rud atá níos éasca le frithghníomhartha neamh-shonracha a tháirgeadh. Tar éis sciath le antigen nó antashubstaint, ní féidir leis an glantach neamh-ianach suíomh an phróitéin neamhcheangailte a shéaladh go héifeachtach, agus ba cheart an próitéin a úsáid mar ghníomhaire séalaithe.

(2) Fórsa ceangailteach meánach

Ceanglaíonn plátaí microplate den sórt sin go héighníomhach leis an próitéin trí bhannaí hidreafóbach ar an dromchla, agus tá siad oiriúnach mar iompróirí soladach-chéim do phróitéiní macromóilíneacha le meáchan móilíneach> 20 kD, le cumas ceangailteach próitéine de 200 go 300 ng IgG / cm2. Mar gheall ar shaintréithe a cheangailteach amháin do mhacramóilíní, tá sé oiriúnach d'iompróirí soladach-chéim mar antasubstaintí neamhíonaithe nó antaiginí chun an acmhainneacht le haghaidh tras-imoibríocht nonspecific a laghdú. Is féidir leis an pláta a bheith ina próitéin támh nó ina ghlantach nonionic mar réiteach séalaithe.

(3) Amination

Tá grúpa aimín luchtaithe dearfach ag an microplate seo tar éis modhnú dromchla, a bhfuil banna hidreafóbach in ionad a bhanna hidreafóbach. Tá an aicme seo de mhicreaplate oiriúnach mar iompróir soladach-chéim do phróitéiní beaga-mhóilín. Trí úsáid a bhaint as maolán oiriúnach agus pH, ceanglaíonn an dromchla móilíní beaga atá luchtaithe go diúltach trí naisc ianach. Mar gheall ar airíonna hydrophilic a dhromchla agus a chumas a bheith faoi cheangal go comhfhiúsach le tras-nascairí eile, is féidir é a úsáid chun móilíní próitéine intuaslagtha i ngníomhairí dí-éillithe a shocrú mar Triton-100, Tween 20, etc. Is é an locht atá ar an bpláta seo. mar gheall ar hidreafóbacht laghdaithe; ina theannta sin, is gá an dromchla a dhúnadh go héifeachtach. Mar gheall ar airíonna dromchla hidreafail agus comhfhiúsacha, ní mór go mbeadh an tuaslagán séalaithe a úsáidtear in ann idirghníomhú le haon ghrúpa feidhme sa ghrúpa aimín neamh-imoibríoch agus an traslinker roghnaithe.

4. Is féidir Dar leis an dath a roinnt ina trédhearcach, dubh, agus bán.

Is é trédhearcach an ceann is coitianta a úsáidtear le haghaidh na dturgnaimh imdhíonta is ginearálta atá nasctha le heinsím. In Relcontrast leis an microplate trédhearcach, tá microplates teimhneach ann freisin le haghaidh braite lonrúil, go ginearálta dubh agus bán. Tá ionsú solais ag an microplate dubh féin, agus mar sin tá a comhartha i bhfad níos ísle ná an microplate bán, mar sin úsáidtear é go ginearálta chun solas láidir a bhrath, mar shampla braite fluaraiseachta. Úsáidtear an microplate bán le haghaidh braite solais lag, a úsáidtear go minic le haghaidh cemiluminescence ginearálta. Ina theannta sin, is féidir leis an microplate dubh fadhb na n-imoibrithe neamh-shonracha a lagú freisin. Ag an am céanna, tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara nach féidir leis an microplate ginearálta a bhrath lonrúil, toisc go bhfuil an solas a astaítear ó imoibriú chemiluminescence isotrópach, más rud é, le microplate trédhearcach, ní bheidh an solas scaipeadh ach amháin ón treo ingearach, ach freisin as an treo cothrománach, solas a dhéanamh go héasca tríd an bhearna idir an poll agus balla poll, a eascraíonn i bhfianaise an luach ionsú solais an poll tionchar ag an poll in aice láimhe astaithe solais.

Ba chóir go mbeadh dea-fheidhmíocht asaithe maith ag microplate maith, luach bán íseal, trédhearcacht ard bun an poll, agus feidhmíocht den chineál céanna idir na plátaí agus idir poill an phláta céanna. Mar gheall ar an difríocht sna hamhábhair agus an difríocht sa phróiseas táirgthe, tá cáilíocht táirgí éagsúla an-difriúil, dá bhrí sin, ní mór feidhmíocht gach baisc de microplate a sheiceáil roimh ré roimh úsáid. Is iad na modhanna iniúchta a úsáidtear go coitianta ná tiúchan áirithe de IgG daonna (go ginearálta 10 ng/ml) atá brataithe le toibreacha pláta ELISA, tar éis níocháin, ag cur caolú cuí antasubstainte IgG frith-dhaonna lipéadaithe einsím le gach tobar, níocháin tar éis caomhnú teasa, ag cur dath an tsubstráit leis, stop an t-imoibriú einsíme, agus tomhais ionsúiteacht an tuaslagáin i ngach tobar faoi seach. Rinneadh na coinníollacha imoibrithe a rialú ionas gur coinníodh léamh gach tobair faoi ionsú thart ar 0.8. Ríomhadh meán na léamha iomlána. Is lú ná 10 % an difríocht idir meán gach léamh aonair agus gach léamh. Is iad na trí mhicreaphlátaí seo a leanas ná A, B, agus C mar shampla.

Modh díreach: chun asaithe IgG Daonna a bhrath ar dhromchla an mhicreaphláta

Modh ceapaire dúbailte antashubstainte: antigen i serum dearfach le haghaidh antashubstaint frith-dhaonna

Mar is léir ón bhfigiúr thuas, sna trí chineál seo de phlátaí bith-einsímí, tá éifeacht asaithe próitéine níos fearr ag microplate Aicme A, ach feabhsaíonn sé freisin íogaireacht asaithe próitéine, ar féidir leo sonraí turgnamhacha níos iontaofa a sholáthar. Ina theannta sin, is féidir leat a iarraidh faoi phláta an difríocht bhaisc. Seo a leanas an difríocht bhaisc de phláta áirithe. Mar is léir ón gcairt sonraí difríochta laistigh den bhaisc, tá cobhsaíocht mhaith idirbhaisc ag an microplate, agus tá an comhéifeacht éagsúlachta laistigh den bhaisc (CV) thart ar 5.0%, atá i bhfad níos ísle ná an comhéifeacht éagsúlachta laistigh den bhaisc. faoi ​​bhun 10.0% sa chaighdeán rialaithe cáilíochta le haghaidh imoibriú imdhíonachta cliniciúil. Dá bhrí sin, mar sin tá sé oiriúnach freisin do thurgnaimh ELISA.