Roimh an turgnamh, ba cheart gach imoibrí agus sampla a chothromú go teocht an tseomra; tar éis iad a athleá, ba chóir samplaí a lártheifneoiriú arís agus snámhán a ghlacadh le haghaidh tástála; le haghaidh imoibrithe nó ullmhú samplach, meascadh agus seachain cúr; moltar calabrú agus samplaí le haghaidh tástála dúblach.

1. Cuir ple: cuir an réiteach caighdeánach oibre leis an gcéad dá thobar ar a seal, agus cuir dhá pholl le haghaidh gach tiúchan de thuaslagán oibre, 100 μ L de gach tobar. Cuirtear samplaí atá le tástáil le toibreacha eile, 100 μ L in aghaidh an tobair (le haghaidh tiúchan an tsampla os cionn an raon tástála, an sampla caolaithe le caoluithe caighdeánacha & samplacha). Bhí an micreaphláta brataithe le scannán agus gortha ag 37 é ℃ ar feadh 90 nóiméad. Leid: Nuair a bheidh an sampla á chur le bun an mhicreaplate, déan iarracht gan teagmháil a dhéanamh leis an mballa poll, croith agus meascadh go réidh, chun boilgeoga a ghiniúint a sheachaint. Ba cheart an t-am breise a rialú laistigh de 10 nóiméad.

2. Antashubstaint/antaigin biotinylated: caith an leacht, agus croith tirim, gan níocháin. Cuireadh 100 µL tuaslagán oibre antashubstainte/antaigin biotinylated láithreach le gach tobar, measctha, micreaphláta móide scannán-brataithe, agus gor ag 37 ℃ ar feadh 1 uair an chloig.

3. Níochán: croith an leacht sa pholl, cuir 350 μ L de leacht níocháin le gach tobar, soak ar feadh 1-2 nóiméad, tarraing amach nó croith an leacht sa mhicreaphláta, agus cuir tirim ar an bpáipéar tiubh ionsúiteach. Déan an pláta níocháin seo arís 3 huaire. Leid: Is féidir an meaisín níocháin a úsáid anseo agus i gcéimeanna níocháin eile. Tá gach céim níocháin riachtanach don turgnamh.

4. comhchuingeach einsím HRP: 100 μ L tuaslagán oibre comhchuingeach einsím in aghaidh an tobair, measctha, brataithe le scannán, agus gortha ag 37 ℃ ar feadh 30 nóiméad.

5. Níochán: caith an leacht sa tobar, agus nigh an pláta 5 huaire ar an mbealach céanna le céim 3.

6. Foshraith: cuir 90 μ L de thuaslagán tsubstráit (TMB) le gach tobar, measc go maith, cuir sciath scannáin, agus gor ag 37 ℃ ar feadh thart ar 15 nóiméad. Nóta: Ba cheart an t-am gorlainne a ghiorrú nó a shíneadh de réir an staid forbartha dath iarbhír, ach gan níos mó ná 30 nóiméad. Is féidir é a fhoirceannadh nuair a bhíonn grádán soiléir le feiceáil sa pholl caighdeánach.

7. Foirceannadh: Cuir 50 leis μ L de thuaslagán foirceannadh do gach tobar chun an t-imoibriú a fhoirceannadh. Tabhair faoi deara: ba cheart go mbeadh ord breise an tuaslagáin foirceanta mar an gcéanna le hord tuaslagáin an tsubstráit.

8. Léigh: Déan dlús optúil (OD) gach tobair a thomhas láithreach ag 450 nm le léitheoir microplate. Ba cheart an léitheoir microplate a oscailt roimh ré chun an nós imeachta tástála a shocrú.

9. Tar éis an turgnaimh, cuir an t-imoibrí neamhúsáidte ar ais sa chuisneoir de réir an teocht stórála sonraithe go dtí an seilfré.